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如何对小鼠进行采血?

如何对小鼠进行采血?

分类:
行业新闻
发布时间:
2020/07/21
【摘要】:
由于小鼠体重限制,一次取血后需要一定的恢复期以保证下次血液样本的质量,严格遵守动物福利也是操作者的基本要求。

     

      血清和血浆的制备
      取血量与重复取血周期的关系
      同一只小鼠需要多次采血
      由于小鼠体重限制,一次取血后需要一定的恢复期以保证下次血液样本的质量,严格遵守动物福利也是操作者的基本要求。小鼠的总血量一般是占体重的6-7%,一次性取血10%不会引起造血系统过度活化及血液成分的重建。(例:若20克小鼠,它的总血量约占1.2-1.4毫升,即每次取120ul-140ul血液不会对小鼠有太大的影响)。
      小鼠只需采单次采血
      但如果想取小鼠的全血,一般能取体重的4%已经很不错了。具体的参考计算:小鼠体重*6-7%(血液占体重百分比)*70%(循环血量占全部血量百分比)*90%(可以取到的循环血量比例)
      常用的采血的方法
      眼眶后静脉丛采血
      (大鼠 0. 4~0. 6 mL,小鼠 0. 2~0. 3 mL)取内径为1.0-1.5mm的玻璃毛细管,临用前折断成2~2.5cm长的毛细管段,浸入1%肝素溶液中,干燥后用。取血时左手抓住鼠两耳之间的颈背部皮肤以固定头部,轻轻向下压迫颈部两侧,引起头部静脉血液回流困难使眼眶静脉丛充血,右手持毛细管由内眦部插入结膜,再轻轻向眼底部方向推进,轻轻旋转毛细管以划破静脉丛,让血液顺毛细管流出,接收入事先准备的容器中。采血后纱布轻压眼部止血。
      摘眼球采血
      此法常用于鼠类大量采血。采血时,用左手固定动物,压迫眼球,尽量使眼球突出,右手用镊子或止血钳迅速摘除眼球,眼眶内很快流出血液。
      尾尖采血
      (小鼠可每次采血约0.1ml,大鼠约0.4ml)剪断尾巴进行取血。注意,剪下来一点就可以,小鼠1-2mm,大鼠3-5mm,流出血液收集即可。过程中可以捋尾巴。血液可以用于涂片,试纸检测血糖等。
      心脏采血
      (大鼠 1~1. 5 mL,小鼠 0. 5~0. 8 mL)心脏采血为无菌采血,采血量大,此方法需在麻醉状态下进行,操作时,选择胸部左侧心脏博动最强处进针,缓慢回抽针筒可见血液流入针管。
      后肢隐静脉采血
      隐静脉采血常用于大小鼠的少量血液采集,单次采血的安全采血量为动物体重的0. 5%,间隔一天多次采血采血量为动物体重的0. 05%,隐静脉采血无需麻醉,待动物固定后,后腿外侧区域剃毛后暴露采血点,采血针刺入采血点,即可获得血液样本。
      断头采血
      左手拇指和食指从背部抓住鼠颈部皮肤,将鼠头朝下,右手用剪刀剪断鼠颈部约1/2-4/5,让血液流入试管。但有由于过于血腥加上动物福利的原因,此方法不建议使用。
      血清及血浆的制备
      血清分离
      经上述的方法取得血液后,在EP管中室温静置一小时以上(或37°水浴1小时,4°冰箱静置2小时或者过夜)以3000rpm离心10分钟,上清即为血清。可在-80°保存。
血浆分离
      使用烘干的肝素管或者有少量液体的肝素抗凝管,将得到的全血与抗凝剂充分混匀,经过3000rpm离心力10分钟得到的上清即为血浆样本。可在4°保存几点,若在-20°或-80°可保存更久,但要测乳酸脱氢酶活性的话,必须要取血后立即测,以获得准确的结果。
      溶血
      正常的血清或者血浆样本为黄色清液,而若为偏红,即为有红细胞破裂而产生溶血现象。
      避免溶血应注意以下的事项:
      1. 采血时要避免小鼠毛发、油脂沾染血液导致溶血,所用的容器、注射器必须清洁干燥,不能有水或者有机溶剂。
      2. 抽血时速度不要太快,速度太快会有气泡产生。如果使用止血带时,止血带不要扎的太久。
      3. 抽出的血放入试管时,要先拔掉针头再放血,同时速度不要太快。
      4. 收集分离血清的全血时应尽量使血液直接进入小管底部,避免管壁或管盖上的血液在离心过程中导致溶血

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