寒湿困脾

　　实验动物：SD大鼠、昆明小鼠

　　模型构建方法：

　　①SD大鼠寒湿困脾模型：在脾虚证模型基础上，每日灌胃寒湿中药煎剂(苍术、厚朴、陈皮、茯苓按3:2:2:3配伍，浓度1.2g/kg)0.2mL/10g(连续8天)，置于湿度85%、温度10℃环境2小时/天(连续9天)，灌胃冰水混合物(0.2mL/10g)每日1次(连续10天);

　　②昆明小鼠寒湿困脾模型：在脾虚证模型基础上，每日灌胃寒湿中药煎剂(同大鼠配方，浓度0.6g/kg)0.1mL/10g(连续7天)，置于湿度90%、温度12℃环境1.5小时/天(连续8天)，灌胃生冷盐水(0.1mL/10g)每日1次(连续9天);

　　成模周期：SD大鼠11-13天/昆明小鼠9-11天

　　评价指标：

　　①行为学指标：SD大鼠组肢体困重、脘腹痞闷、食欲不振(进食量减少65%-70%)、便溏黏腻(每日排便次数增加3-4倍)、活动量减少75%-80%;昆明小鼠组嗜睡懒动、体重较对照组低30%-35%、粪便黏滞不成形、自主活动次数减少70%-75%;

　　②血清学指标：SD大鼠血清胃泌素(GAS)降低35%-40%、淀粉酶(AMY)降低30%-35%、总胆固醇(TC)升高25%-30%、甘油三酯(TG)升高20%-25%;昆明小鼠血清胃动素(MTL)降低30%-35%、丙二醛(MDA)升高35%-40%、超氧化物歧化酶(SOD)活性降低25%-30%、白蛋白(ALB)降低20%-25%;

　　③病理形态学：SD大鼠胃黏膜水肿增厚、腺体分泌亢进、肠黏膜黏液分泌增多、黏膜下层水肿;昆明小鼠胃黏膜充血水肿、肠黏膜上皮细胞黏液附着增多、固有层轻度炎细胞浸润;

　　④组织指标：SD大鼠胃组织水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达升高2倍、紧密连接蛋白(Claudin-1)mRNA表达降低1.8倍;昆明小鼠肠组织水通道蛋白8(AQP8)mRNA表达升高1.5倍、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性升高25%-30%;

　　⑤功能指标：SD大鼠胃排空延迟(排空时间延长45%-50%)、小肠推进率降低35%-40%、耐寒能力下降(低温存活时间缩短50%-55%)、水负荷排泄延迟(排尿量减少30%-35%);昆明小鼠胃排空时间延长40%-45%、小肠推进率降低30%-35%、体力耐力下降(游泳时间缩短50%-55%)、水负荷排泄减少25%-30%;