(一)徒手抓取小鼠
小鼠行动比大鼠敏捷，行走时尾部呈水平伸直，以手指捏住小鼠尾根至尾中段的部位即可将小鼠提起。当小鼠贴壁行走时尾部紧贴笼盒内壁，不易抓到鼠尾，可使用头部裹有橡皮的镊子夹住鼠尾根部(靠近肛门)，对于极具攻击性的小鼠也可采用此法。采用抓鼠尾的方式时切忌抓尾尖以及长时间倒提小鼠。乳小鼠尾部短小柔嫩不便抓，捉取7日龄内的乳小鼠可用头部裹有橡皮的镊子轻轻夹住小鼠颈后的皮肤将其提出，或以手指肚挟住小鼠腹部两侧，7日龄以上的小鼠可以将其扣于掌心提取，离乳前后的小鼠善跳跃，捉拿时宜部分打开笼盖，防止动物跳出。
(二)徒手保定小鼠
徒手保定小鼠时，以拇指和示指捏住小鼠耳后颈背部皮肤，并将鼠尾夹在小指和无名指中，如小鼠个体较大或挣扎强烈，可多抓住其背部的皮肤。
(三)小鼠的器械保定
小鼠保定器(又称固定器)的形状和用法都和大鼠的类似，根据实验目的和动物的个体大小选用合适规格和种类，让动物自行钻入固定器内并关闭入口，使其不能退出即可。此种保定时动物呈蜷伏姿势，尾部露出，常用于尾静脉注射、采血等操作。